&使用流程

（一）载体制备与储存

形式：冻干粉（4°C运输，-20°C长期储存）。

复溶：离心后加无菌水或TE缓冲液溶解至20 ng/μL 。

（二）目标基因克隆

酶切连接：用限制性内切酶切割载体MCS和目的片段，连接后转化大肠杆菌。

筛选验证：

细菌筛选：含Kanamyci 的 LB平板 。

蓝白斑筛选：利用lacZa系统鉴定重组子 。

测序确认：挑取单菌落提取质粒，验证插入序列正确性。

（三）农杆菌转化

将重组质粒电转或冻融法导入农杆菌。

涂布于含Kanamycin和利福平的平板筛选 。

（四）植物转化与筛选

转化方法：农杆菌介导的叶盘法、花序浸染等。

抗性筛选：

拟南芥：Hygromycin B。

水稻/烟草：Hygromycin B。

阳性植株鉴定：PCR、Southern blot或报告基因表达。

试剂信息

英文名称：pCAMBIA1300 Plant Expression Vector

中文名称：pCAMBIA1300植物表达载体

载体用途： 植物表达载体

载体大小： 8958bp

克隆菌株： DH5α、Stbl3等

启动子： Lac, CaMV 35S

复制子： pVS1 oriV, ori

表达宿主： 植物细胞

5'测序引物： M13F: TGTAAAACGACGGCCAGT

3'测序引物： 根据目的序列设计引物

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

生产厂商：西安强化生物科技

&作用机制

pCAMBIA1300的作用分为三个阶段：

（一）载体构建（大肠杆菌）：

将目标基因插入MCS，构建重组质粒，通过卡那霉素抗性和蓝白斑筛选阳性克隆。

（二）农杆菌转化：

通过三亲交配或电穿孔将载体转入农杆菌，利用pVS1复制子维持稳定性。

（三）植物转化与筛选：

农杆菌侵染植物组织，T-DNA携带目标基因整合至植物基因组。

转化植株在含潮霉素B的培养基中生长，仅成功整合HygR基因的植株存活。

关键优势：

高通用性：无内源报告基因，用户可自由插入任何启动子-基因-终止子组合。

高效稳定：pVS1复制子解决农杆菌中质粒丢失问题，双增强35S启动子提升表达效率。

&相关试剂

iFluor594 Phalloidin

iFluor 555 Phalloidin

MitoTracker Deep Red FM

Alexa Fluor 680-Streptavidin

BODIPY 480/508-Cholesterol

Coelenterazine 400 a 腔肠素400a

Carboxy-PTIO(cPTIO)一氧化氮清除剂

Blood Group A Trisaccharide 血型A三糖

Blood Group B Trisaccharide 血型B三糖

Blood Group H Disaccharide 血型H二糖

TOP10 Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

AFDye 488 NHS ester (Equivalent toAlexa Fluor 488 NHS ester）

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本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！